Nhân vật chính của phim là cậu học sinh trung học Peter Parker vô tình bị cắn bởi một con nhện biến đổi gen. Cậu phát hiện ra mình có những khả năng siêu phàm của loài nhện. Cái chết bất ngờ của bác Ben do một tên cướp gây ra làm cho Peter nhận ra rằng: "Với sức mạnh phi thường phải đi kèm với trách nhiệm to lớn". Cậu đã khoác lên mình bộ trang phục huyền thoại của Spider-Man và bắt đầu con đường hành hiệp.